类POD活性TMB,pod活性测定需注意哪些问题
原标题:类POD活性TMB,pod活性测定需注意哪些问题
导读:
辣根过氧化物酶显色不正确的是1、题主是否想询问“辣根过氧化物酶显色不正确的是原因吗”原因如下:底物TMB和过氧化氢不足或浓度不正确,导致显色反应不完全。POD酶活性降低,可能...
辣根过氧化物酶显色不正确的是
1、题主是否想询问“辣根过氧化物酶显色不正确的是原因吗”原因如下:底物TMB和过氧化氢不足或浓度不正确,导致显色反应不完全。Pod酶活性降低,可能是由于贮存条件不当、使用过期等原因导致。显色时间不够或过长,可能会导致显色反应不完全或出现背景噪音。环境温度、湿度等因素对显色反应产生影响。
2、正确答案:D 解析:辣根过氧化物酶(HRP)的常见底物为邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB),前者反应后显橙黄色,后者为蓝色;碱性磷酸酶(AP)的底物为对硝基苯磷酸酯(p-NPP),反应后为黄色 。
3、TMB显色原理:TMB是一种底物,可以被辣根过氧化物酶(HRP)催化氧化而产生显色产物。在酶标记实验中,通常将TMB与过氧化氢(H2O2)混合,然后加入HRP标记的抗体或其他分子。HRP与TMB-H2O2反应产生的显色产物为蓝色,通常可通过对应波长下的吸光度测量或肉眼观察进行定量或定性分析。
4、辣根过氧化物酶,其在酶学中的分类号为EC 17,是一种特殊的酶,其主要作用是催化Donor与H2O2反应,生成氧化产物和水。这种酶因其主要来源于辣根,故被命名为辣根过氧化物酶(HRP)。
5、稳定性差,有致癌性。辣根过氧化物酶,是临床检验试剂中的常用酶。其缺点是稳定性差,有致癌性。该产品不但广泛用于多个生化检测项目,也广泛运用于免疫类(ELISA)试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分,对试剂盒的质量有重要影响。
6、辣根过氧化物酶(HRP)是一种由无色酶蛋白与棕色铁卟啉结合形成的糖蛋白,其中糖含量达到18%。这种酶是由多个结构相似的酶分子构成的复合体,其分子量大约为40,000道尔顿。HRP的等电点范围为pH3~9,表明其在不同pH条件下都能保持活性。